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Aflatoxin은 Aspergillus속에서 생산되는 mycotoxin으로 주로 사료, 식품, 농산물 등에서 발견되고 있으며, ppb level로도 암을 유발시키는 치명적인 독소입니다.
Aflatoxin B1, B2, G1, G2 중에 B1 의 독성이 가장 강하며, 우리나라의 식품공전에서는 아플라톡신 B1에 대하여 10 ppb이하로 허용기준을 설정하고 있습니다.

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국가 분류           허용 기준 ( 표시 수치 이하. 단위: ppb )
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Total Aflatoxin in all food            Aflatoxin B1 in animal feed
한국                 10                   5~50
미국                 20                   20~300
중국               5~20                          10~50
일본                 10                     -
영국                            4                   5~50
독일                   4                   5~50
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Aflatoxin 분석을 위해 필요한 HPLC 하드웨어로는
        1) 이동상펌프,
        2) 자동시료주입기(or manual injector),
        3) 컬럼오븐,
        4) 형광검출기(FLD)가 필요합니다.


미량 검출(ppb 또는 그 이하)을 위해 형광검출기를 사용하며, 형광검출기에서의 감도를 높이기위해,
        1) TFA(trifluoroacetic acid)를 이용한 유도체화 방법과

online 후컬럼 유도체화 방법으로,
        2) PBPB(피리듐 브롬화수소산 과브롬산염),
        3) PHRED(광화학 반응장치의 일종),
        4) KOBRA(브롬전기 발생장치)법 등이 사용됩니다.

* KOBRA cell을 이용한 컬럼후 유도체화법
KOBRA법은 aflatoxin B1, G1을 전기적으로 유도체화시켜 분석하는 방법으로 B1, G1 구조의 왼쪽 이중결합에 Br을 반응시켜 형광성을 더 강하게 만드는 유도체화 방법입니다. 이를 위해 이동상에 Br이 첨가되며, 컬럼에서 아플라톡신의 분리가 이루어지고 난 후 형광검출기로 분석하기 전에 KOBRA cell을 지나면서 약 4초간 유도체화가 자동으로 진행됩니다.

* PHRED(광화학반응법)
광화학 반응법은 254nm의 UV를 reactor coil(약 1mL)에 쪼여 분리된 aflatoxin B1의 이중결합에 OH를 붙이는 유도체화를 하여 감도를 높이는 방법입니다. 컬럼을 통해 분리된 aflatoxin은 광화학 유도체화 장치로 들어가서 유도체화가 진행된 후 형광검출기를 통해 분석합니다.

상기 두 가지 방법은 모두 온라인(자동)으로 진행됩니다. 실제 시료의 전처리를 위해서는 immuno-affinity column이 같이 필요합니다.


유도체화 방법에 따른 Aflatoxin 최소검출한계 (LOD) 비교
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유도체화 및 검출 방법 (100µL 주입) LOD (µg/kg) (ppb)
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Pre-column TFA - FLD                                 0.05~0.5
Post-column KOBRA - FLD               0.008~0.014
Post-column PBPB - FLD               0.001~0.003
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